圆二色(CD)光谱法和红外光谱法分析高浓度抗体高级结构HOS

概述
治疗性抗体的市场在过去十年中急剧扩大，并成为主要的治疗性蛋白质之一。在治疗性抗体的不同物理性质中，高级结构(high-order structure, HOS)是其表征的重要组成部分。最常用的HOS表征方法之一是圆二色光谱（CD）。它提供了相对低浓度蛋白溶液的二级和三级结构信息 (≤10 mg/mL)。红外(IR)光谱法也是一种广泛用于分析蛋白质二级结构的方法。它不仅可以测量高浓度的蛋白质溶液(100mg/mL或更高)，还可以测量悬浮液和固体。由于存在不同的HOS分析技术，建议使用多种技术的正交法来全面表征HOS。在本研究中，我们根据远紫外CD和红外光谱估算了浓度为5.8至23.1 mg/mL的兔血清IgG的二级结构含量。圆二色二级结构分析(SSE)中，采用了同时测量CD和吸收的J-1500型圆二色谱仪，采用了β-Sheet估算精度较高的BeStSel算法。对于红外SSE，我们使用了我们最新的红外光谱仪FT/IR- 4x，以及我们最新改进的红外SSE软件IR SSE-4000。 此外，通过选择适当的光程长，我们还成功地获得了5.8-156.2 mg/mL的IgG近紫外CD光谱。

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